ⅠNukleinska kiselinaiuvod
Nukleinska kiselina se dijeli na deoksiribonukleinsku kiselinu (DNA) i ribonukleinsku kiselinu (RNA), među kojima se RNA dijeli na ribosomsku RNA (rRNA), glasničku RNA (mRNA) i prijenosnu RNA (tRNA) prema svojim različitim funkcijama.DNA je uglavnom koncentrirana u jezgri, mitohondrijima i kloroformu, dok je RNA uglavnom raspoređena u citoplazmi.Kao materijalna osnova ekspresije gena, ekstrakcija nukleinske kiseline ima iznimno važnu ulogu u istraživanjima molekularne biologije i kliničkoj molekularnoj dijagnostici.Koncentracija i čistoća ekstrakcije nukleinske kiseline izravno će utjecati na naknadni PCR, sekvenciranje, konstrukciju vektora, probavu enzima i druge eksperimente.
Ⅱ Ekstrakcija nukleinske kiseline i metoda pročišćavanja
① Metoda ekstrakcije fenolom/kloroformom
Ekstrakcija fenolom/kloroformom je klasična metoda za ekstrakciju DNK, koja uglavnom koristi dva različita organska otapala za obradu uzoraka, otapanje nukleinske kiseline na bazi DNK u vodenoj fazi, lipida u organskoj fazi i proteina između dvije faze.Ova metoda ima prednosti niske cijene, visoke čistoće i dobrog učinka.Nedostaci su kompliciran rad i dugo vrijeme.
② Trizol metoda
Trizol metoda je klasična metoda za ekstrakciju RNK.Trizol metoda se dijeli na vodenu fazu i organsku fazu nakon centrifugiranja s kloroformom, u kojoj se RNA otopi u vodenoj fazi, vodena faza se prebaci u novu EP epruvetu, taloži se nakon dodavanja izopropanola, a zatim pročišćavanje etanolom.Ova metoda je prikladna za ekstrakciju RNA iz životinjskih tkiva, stanica i bakterija.
③ Metoda pročišćavanja centrifugalne kolone
Metoda pročišćavanja kolone centrifuge može adsorbirati DNA specifično kroz posebne materijale za adsorpciju silikonske matrice, dok RNA i protein mogu proći glatko, a zatim koristiti visoku sol nisku PH za kombiniranje nukleinske kiseline, nisku sol visoku PH vrijednost elucije za odvajanje i pročišćavanje nukleinske kiseline.Prednosti su visoka koncentracija pročišćavanja, visoka stabilnost, nema potrebe za organskim otapalom i niska cijena.Nedostatak je što treba centrifugirati korak po korak, više radnih koraka.
④ Metoda magnetskih kuglica
Metoda magnetskih kuglica je razdvajanje uzorka staničnog tkiva kroz lizat, oslobađanje nukleinske kiseline u uzorku, a zatim se molekule nukleinske kiseline specifično adsorbiraju na površini magnetskih kuglica, dok nečistoće poput proteina i šećera ostaju u tekućina.Kroz korake cijepanja staničnog tkiva, vezivanja magnetskih kuglica s nukleinskom kiselinom, ispiranja nukleinske kiseline, eluacije nukleinske kiseline itd., konačno se dobiva čista nukleinska kiselina.Prednosti su jednostavno rukovanje i kratko vrijeme korištenja, bez potrebe za postupnim centrifugiranjem.Ima niske tehničke zahtjeve i može ostvariti automatski i masovni rad.Specifična kombinacija magnetskih kuglica i nukleinske kiseline čini ekstrahiranu nukleinsku kiselinu visoke koncentracije i čistoće.Nedostatak je što je trenutna tržišna cijena relativno skupa.
⑤ Ostale metode
Uz gore navedene četiri metode, postoje krekiranje ključanjem, metoda koncentrirane soli, metoda anionskog deterdženta, ultrazvučna metoda i enzimska metoda itd.
Ⅲ Vrsta ekstrakcije nukleinske kiseline
Foregene ima vodeću svjetsku izravnu PCR platformu, platformu za izolaciju RNK u dva stupca (samo DNK + samo RNK).Glavni proizvodi uključuju komplete za izolaciju DNA/RNA, PCR i Direct PCR reagense serije molekularnih laboratorijskih reagensa.
① Ukupna ekstrakcija RNK
Uzorci ekstrakcije ukupne RNA uključuju krv, stanice, životinjska tkiva, biljke, viruse itd. Visoka čistoća i visoka koncentracija ukupne RNA mogu se dobiti ekstrakcijom ukupne RNA, koja se može koristiti u RT-PCR, analizi čipova, in vitro translaciji, molekularno kloniranje, Dot Blot i drugi eksperimenti.
Povezano s ForegenomKompleti za izolaciju RNK
Komplet za izolaciju ukupne životinjske RNK--Brzo i učinkovito ekstrahirajte ukupnu RNK visoke čistoće i kvalitete iz različitih životinjskih tkiva.
Cell Total RNA Isolation Kit--Visoko pročišćena i visokokvalitetna ukupna RNA može se dobiti iz različitih uzgojenih stanica u 11 minuta.
Komplet za izolaciju ukupne biljne RNK--Brzo ekstrahirajte visokokvalitetnu ukupnu RNA iz biljnih uzoraka s niskim sadržajem polisaharida i polifenola.
Kit za izolaciju virusne RNK--Brzo izolirajte i pročistite virusnu RNK iz uzoraka kao što su plazma, serum, tjelesne tekućine bez stanica i supernatanti stanične kulture.
② Ekstrakcija genomske DNA
Uzorci ekstrakcije genomske DNK uključuju tlo, izmet, krv, stanice, životinjska tkiva, biljke, viruse itd. Ekstrakcija genomske DNK može se koristiti u probavi enzima, konstrukciji biblioteke DNK, PCR-u, pripremi antitijela, Western blot hibridizacijskoj analizi, genskom čipu, visokim - sekvenciranje propusnosti i drugi eksperimenti.
Povezano s ForegenomKompleti za izolaciju DNK
Kit za izolaciju DNK životinjskog tkiva--Brzo izdvajanje i pročišćavanje genomske DNA iz više izvora, kao što su životinjska tkiva, stanice itd.
Blood DNA Midi Kit (1-5 ml)--Brzo pročistite visokokvalitetnu genomsku DNK iz antikoagulirane krvi (1-5 ml).
Komplet za izolaciju DNK bukalnog brisa/FTA kartice--Brzo pročistite visokokvalitetnu genomsku DNK iz uzoraka bukalnog brisa/FTA kartice.
Set za izolaciju DNK biljke--Brzo pročišćavanje i dobivanje visokokvalitetne genomske DNK iz biljnih uzoraka (uključujući polisaharide i biljne uzorke polifenola)
③ Ekstrakcija plazmida
Plazmid je vrsta kružne male molekule DNA u stanicama, koja je uobičajeni prijenosnik za rekombinaciju DNA.Metoda ekstrakcije plazmida je uklanjanje RNA, odvajanje plazmida od bakterijske genomske DNA i uklanjanje proteina i drugih nečistoća kako bi se dobio relativno čisti plazmid.
General Plasmid Mini Kit-- Brzo pročistite visokokvalitetnu plazmidnu DNA iz transformiranih bakterija za rutinske eksperimente molekularne biologije kao što su transformacija i probava enzima
④ Druge vrste ekstrakcije, ekstrakcija miRNA, itd.
Komplet za izolaciju životinjske miRNA--Brzo i učinkovito ekstrahirajte male RNA fragmente od 20-200 nt miRNA, siRNA, snRNA iz različitih životinjskih tkiva i stanica
Ⅳ Zahtjevi za ekstrakciju nukleinske kiseline i rezultat pročišćavanjas
① Osigurati cjelovitost primarne strukture nukleinske kiseline.
② Smanjite interferenciju proteina, šećera, lipida i drugih makromolekula
③ U uzorcima nukleinske kiseline ne smije biti organskog otapala ili visoke koncentracije metalnih iona koji mogu inhibirati enzim.
④ RNK i druge kontaminacije nukleinske kiseline treba eliminirati prilikom ekstrakcije DNK, i obrnuto.
Vrijeme objave: 24. studenog 2022
